По везикулам можно судить о здоровье сердца

Ученые «3-го меда» совместно с американскими коллегами сделали интересное открытие в области кардиологии.

Клетки тела выделяют в межклеточную среду везикулы - пузырьки, покрытые двухслойной липидной мембраной. Эти везикулы выполняют функции своеобразной «пузырьковой» почты, перенося между клетками белки, липиды и микроРНК. При патологии количество и качественный состав этих экстрацеллюлярных везикул (ЭВ) может меняться, поэтому ЭВ интересуют исследователей как возможные маркеры некоторых заболеваний. К сожалению, подсчитывать везикулы и анализировать их типы сложно из-за их малых размеров.

Специалисты лаборатории атеротромбоза Московского государственного медико-стоматологического университета им. А.И. Евдокимова совместно с американским Национальным институтом детского здоровья и развития человека имени Юнис Кеннеди Шрайвер разработали новый подход, позволяющий характеризовать отдельные типы ЭВ. Метод основан на использовании магнитных наночастиц, связанных с определёнными антителами, которые реагируют с белками на мембране везикул.

Метод опробовали на 17 здоровых добровольцах и 13 больных острым коронарным синдромом. У испытуемых брали кровь и анализировали ЭВ. Состояние клеток, выделивших везикулы, можно определить по клеточным антигенам, расположенным на поверхности ЭВ, и для диагностики важно оценить не только общее количество, но индивидуальный тип везикул.

Сначала исследователи связали магнитные наночастицы с антителами к человеческим белкам CD31, СD41a и CD63. Комбинация этих маркеров позволяет определить ЭВ тромбоцитарного и эндотелиального происхождения. (Эндотелий - клетки, выстилающие внутреннюю стенку кровеносных сосудов). Далее наночастицы инкубировали с сывороткой крови, где они образовывали комплексы с ЭВ, несущими соответствующие маркеры, и окрашивали флуоресцирующими антителами. Комплексы «везикула - магнитная наночастица» отделяли от свободных антител в сильном магнитном поле на магнитных колонках, а затем подсчитали их количество на проточном цитофлуориметре. Благодаря тому, что триггером для цитофлуориметра служила флуоресценция, а не размеры частиц, исследователи смогли проанализировать даже самые мелкие ЭВ менее 300 нм в диаметре.

Использовав эту методику, исследователи впервые показали, что у пациентов с острым коронарным синдромом количество ЭВ в плазме существенно выше, чем у здоровых добровольцев. Наибольшие численные различия имеют место в случае острой ишемии миокарда.

Разработанная методика позволила оценить качественный состав везикул. Оказалось, что общее количество ЭВ в плазме больных возрастает за счёт везикул, несущих маркер CD41a, что указывает на их тромбоцитарное происхождение.

Учёные предположили, что этот феномен может отражать процесс активации тромбоцитов при развитии острой ишемии миокарда. По мнению исследователей, ЭВ можно рассматривать как один из наиболее ранних маркеров развития острого коронарного синдрома.

Дальнейшее изучение антигенного состава везикул позволит узнать много нового о состоянии выделивших их клеток и развивать новый метод диагностики прогрессирующей стадии сердечно-сосудистых заболеваний.

Исследование выполнено при грантовой поддержке правительства Российской Федерации